3D细胞培养己经风靡全球，在干细胞研究领域是必须用的培养方法。

如何让你的3D培养的结果更有用更有说服力，做成石碏包埋块，切成组织片是非常有用的方法和手段，可鉴定你想要的许多许多3D细胞的特性。这里我把我们的实验方法分享给大家。

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王孝养

2维（2D）培养的局限性和3维（3D）培养的优点引来诸多关注，一场细胞由2D培养走向3D的变革正在发生。

3D培养系统大体可分为两种类型：基于scaffold的培养体系和无scaffold的培养体系。要想清楚的知道细胞或组织器官培养后的形态结构或者一些标志物特征，将3D培养的细胞做成组织切片放在载玻片上，再做H&E染色或其他染色非常有用。

这两张图显示长PET膜上的细胞培养的方法。

6孔板上的insert,底部是PET膜。

第一步：切膜

在切膜或琼脂糖凝胶包埋前细胞要先用4%的多聚甲醛或10%中性福尔马林固定1小时左右。

膜

沒膜的细胞pellets，当然不用切膜。

第二步 琼脂糖凝胶包埋

包好的膜

整形

悬浮3D Sphere 细胞直接与琼脂糖凝胶混合。

细胞和琼脂糖凝胶的混合液冰上变硬后的尊容。

第三步 组织处理—脱水、脱脂、浸蜡

琼脂糖凝胶包埋好的胶块放入cassette准备处理。

全自动半封闭组织处理仪里脱水、脱脂、浸碏。

第四步 石碏包埋

包埋仪

包埋控制膜的方向。

细胞Pellet包埋好的碏块。

长在膜上的细胞包好后的碏块。

第五步 修片和切片

修片

切片

浮片

捞片

第六步 染色

全自动染色仪做H&E染色

H&E染色

特殊染色

3D sphere 细胞的免疫染色。

王孝养博士简介： 

VitroVivo生物技术公司CEO，专长于组织分子病理检测。

原桂林医学院教授、主任医师、呼吸内科主任；后在美国国立卫生研究院/国立癌症研究所（NIH/NCI）和Georgetown大学从事癌症领域的科研工作达11年；曾担任美国GeneCopoeia公司产品和服务部经理；也是美国华人干细胞协会的组织者和发起人之一，任副会长。

在高水平杂志发表中英文论文近80篇，参编书籍两本，是十余本英文杂志的审稿人，并作为课题负责人主持过四项科研课题（两项美国课题，两项中国课题）。

VitroVivo生物技术公司能独立开展全套的组织学和分子病理学相关服务，主要为美国国立卫生研究院和美国的大学和生物医药公司提供技术服务，亦为其他地区包括中国大陆客户提供技术支持。网址：http://www.vitrovivo.com，欢迎垂询。

需要技术支持亦可通过我们与王孝养博士沟通。

Daniel微信号：xiefengyis

恒祥咨询，来自美国

专注于为中国医生和医药生物研究者服务